儲存型液氮罐(guan)在實驗室(shi)生物(wu)實驗中(zhong)的使用規范(fan)

一(yi)、細胞(bao)培養(yang)中使用(yong)液氮罐的一(yi)般程序

     細胞培(pei)養(yang)的一般過程，主要包括準備、取材、培(pei)養(yang)和(he)凍存復蘇4步。為(wei)保存細胞，細胞株如果是不(bu)易突變的(de)情況下一定要使用(yong)液(ye)氮(dan)深冷(leng)凍存。使用(yong)常(chang)規的(de)液(ye)相液(ye)氮(dan)罐(guan)，一般實驗室使用(yong)35升125口徑儲(chu)存型液(ye)氮罐，先將細胞(bao)(bao)處理，把含(han)有保護劑的(de)培養基加入凍存管(guan)(guan)內，管(guan)(guan)內放(fang)有需要凍存的(de)細胞(bao)(bao)，利用(yong)程序降(jiang)(jiang)溫儀，或者使用(yong)冰箱(xiang)梯度降(jiang)(jiang)溫，最后在液(ye)氮中長期保存。在-196度(du)保(bao)存條件下，細胞保(bao)存的(de)時(shi)間幾乎(hu)是無限的(de)。

目前(qian)美(mei)國標(biao)準(zhun)細(xi)胞庫(ku)或(huo)細(xi)胞銀行(ATCC)液氮凍存(cun)有3200個已經過(guo)鑒定(ding)的細(xi)胞系(xi)(1992)，其中(zhong)包(bao)括來自正(zheng)常人和(he)各種疾(ji)病患者的皮膚成纖(xian)維細胞系(xi)和(he)來自不同物種的近75個雜交瘤細(xi)胞株(zhu)。

二(er)、胚胎(tai)冷凍保存技術

胚胎冷凍保存技術是指(zhi)在(zai)低(di)溫(wen)(wen)條(tiao)件下利用低(di)溫(wen)(wen)保護劑保存胚胎的一門技術。這一技術是20世紀后(hou)半葉隨(sui)著人工授精(jing)技(ji)術(shu)廣泛(fan)應(ying)用而產生(sheng)的(de)，目前已成為了現代生(sheng)命科學研究必備的(de)手(shou)段之一(yi)。動物胚胎的(de)冷凍保存原(yuan)理就是因為低(di)(di)溫(wen)降低(di)(di)了胚胎內的(de)變質反應(ying)速(su)度(du)，細胞(bao)保存的(de)溫(wen)度(du)越(yue)低(di)(di)，細胞(bao)及(ji)生(sheng)物樣(yang)品的(de)保存時間就越(yue)長。

目(mu)前已經有很多種生物制品(pin)細胞(bao)胚胎等的冷(leng)(leng)凍(dong)(dong)保存(cun)深冷(leng)(leng)保存(cun)方法，包括慢速(su)(su)冷(leng)(leng)凍(dong)(dong)法、快速(su)(su)冷(leng)(leng)凍(dong)(dong)法、一步冷(leng)(leng)凍(dong)(dong)法、直接(jie)移(yi)植深冷(leng)(leng)法和(he)玻璃冷(leng)(leng)凍(dong)(dong)，超級冷(leng)(leng)凍(dong)(dong)法都(dou)可以快速(su)(su)冷(leng)(leng)凍(dong)(dong)

①將胚胎在室溫下(xia)放人25％玻(bo)璃(li)化溶(rong)液(VS液)中(zhong)預(yu)處理15min；

②將預處理(li)后的胚(pei)胎放(fang)在高(gao)濃度(75％一90％)的VS液(ye)中保存(cun)20—40min；

③將經過兩步抗凍(dong)劑處理(li)的胚胎直接(jie)投入(ru)液氮(dan)中(zhong)保存。

此外還可以用液氮罐保存菌種、疫苗、骨組織、精子等物質，均可達到很好的長期存儲的效果